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EHA105感受態(tài)

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標簽:感受態(tài) 
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產品簡介
EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而來,為 C58 型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基
Rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105
(pTiBo542DT-DNA),此質粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的 T-DNA 轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體 T
DNA 順利轉移)。EHA105 菌株適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產的 EHA105
學轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng) pCAMBIA2301 質粒檢測轉化效率≥104 cfu/μg DNA。
產品組成
組分 
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 外,無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出,在手心融化成冰水混合物,置于冰水浴中;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中,用手撥打管底混勻,依次于冰上靜置 10 分鐘、液
氮冷凍 5 分鐘(或干冰乙醇浴和-80 ℃冰凍)、37 ℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘;
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基,于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時;
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB
平板上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 (當平板只含有 50 μg/ml Kan 時,28℃培養(yǎng) 48h 即可;平板
中同時加入 50 μg/ml Kan20 μg/ml Rif 時,需 28℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要
28℃培養(yǎng) 72-90 h。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10;
3. 利福平濃度不應高于 25 μg/μl,利福平濃度過高不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低(可以忽略),所以相關抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者:上海語純生物科技有限公司

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