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產(chǎn)品分類：

Nexell細胞系/株 Nexell原代細胞 Nexell細胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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LBA4404感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）

產(chǎn)品貨號：EC96302

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

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標簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

LBA4404菌株為 Ach5型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此

菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的章魚堿型 Ti 質(zhì)粒 pAL4404，此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入

植物基因組必需的元件，pAL4404 質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T

DNA 順利轉(zhuǎn)移)。 pAL4404 型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標簽：Strep，賦予 LBA4404 菌株鏈霉素抗性，適用于菸

草、番茄、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司開發(fā)的 LBA4404 電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：

經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

LBA4404

電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

10 × 50μL

100 × 50μL

定制

基因型：Ach5 (RifR) Ti pAL4404 (StrepR) Octopine

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除章魚堿型 Ti 質(zhì)粒 pAL4404 外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工

作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預冷；

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5μl），用 200

μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)�；旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；

3. 開啟電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插

入冰中，加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。

（注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進行操作）

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當平板只含有 50μg/ml Kan 時，28℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同時

加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要 28 ℃

培養(yǎng) 72~90 h）。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞解凍后應立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應高于 25μg/μl，利福平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率；

4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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