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NCI-H1299人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)

產(chǎn)品貨號(hào):BH0185

產(chǎn)品規(guī)格:1×10^6

產(chǎn)品價(jià)格: ¥1580

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標(biāo)簽:細(xì)胞系/株 
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細(xì)胞介紹

這株細(xì)胞來(lái)源于一個(gè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。細(xì)胞均一性的部分缺失p53蛋白,并缺少p53蛋白表達(dá)。 細(xì)胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,而不合成促胃液釋放肽(GRP)

細(xì)胞特性

1) 來(lái)源:肺癌;非小細(xì)胞肺癌;轉(zhuǎn)移灶;淋巴結(jié)

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞 貼壁生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存:干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?/font>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。 

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1準(zhǔn)備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                     86 %

優(yōu)質(zhì)胎牛血清                      10 %

P/S青霉素-鏈霉素(                 1%

GlutaMAX-1谷氨酰胺                 1%

HEPES 1M Buffer solution              1%

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉              1%

注意:該細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基容易變黃需要及時(shí)換液。

1) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

2) 凍存液90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)

二.細(xì)胞處理

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培養(yǎng)瓶中T251-2mLT752-3mL,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng):

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

 

原創(chuàng)作者:上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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